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技术支持
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产品货号 |
产品名称 |
包装规格 |
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BLE028-1B-200U |
SUMO蛋白酶 |
200U/20μl |
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BLE028-1B-1KU |
1000U/100μl |
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BLE028-1B-10KU |
10KU/1ml |
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BLE028-1B-200KU |
200KU/20ml |
来源于大肠杆菌重组表达的SUMO蛋白酶（SUMO Protease）,也称为ULP蛋白酶,是一种具有较高活性的半胱氨酸蛋白酶。SUMO蛋白酶以一种非常特异的方式切割蛋白，相对于 EK 和 TEV 等蛋白酶的短小识别位点,它特异性识别类泛素(UBL)蛋白的三级结构-SUMO(Small Ubiquitin-LikeModifier)，而不是特定氨基酸序列，酶切后目的蛋白残留有多余氨基酸。 SUMO酶不对目标蛋白进行切割，酶切割融合蛋白后释放的目的蛋白不带多余的氨基酸，在基因工程的表达中是一个理想的工具。该酶可在较广泛的温度、pH范围内发挥作用。本公司生产的SUMO蛋白酶含有His标签，保证了SUMO蛋白酶高亲和力的结合Ni-NTA。酶切后，可通过Ni-NTA Resin亲和纯化，很容易地将SUMO标签、SUMO蛋白酶去除。
产品名称
SUMO蛋白酶（SUMO Protease）
酶学编号
/
CAS编号
/
来 源
酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）
形 态
溶液（含50％甘油）
酶 活
10U/μl
纯 度
≥95%（SDS-PAGE）
单位定义
1个活性单位（U）是指在30°C，pH 8.0条件下反应1h，能够切割2μg对照底物达90.0％以上所需要的酶量。
用 途
融合蛋白标签剪切去除
储存条件
温度：-25℃~ -5℃保存 （注：避免温度低于-25℃发生冻结；若长时间冻结会导致活性部分丧失）
有效期：24个月
酶切条件
1）由于不同目的蛋白具有不同的特性，所以在实际使用时，建议对酶和待酶切的目的蛋白的比例进行适当优化；
2）带有SUMO标签的目的蛋白酶切反应的温度与时间，可以视情况进行适当调整，参考如下。
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反应温度 |
反应时间 |
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4℃ |
15-16h |
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16℃ |
4h |
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25℃ |
1.5h |
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30℃ |
1h |
3）取20μL样品进行SDS-PAGE电泳分析，确定反应所需的合适酶量。在实际操作过程中，如果有必要，还可以在上述反应的不同时间点取少量样品，后续通过电泳分析来确定优化的反应时间。
4）如果目的蛋白要求低温，可将反应体系置于4℃，延长反应时间，并适当增加SUMO Protease用量，以确保酶切效果。
推荐使用条件
储存缓冲液：25 mmol/L Tris-HCl (pH 8.0), 250 mmol/L NaCl, 0.1% NP-40, 0.5 mmol/L DTT, 50% (v/v) 甘油。
10×SUMO Protease Buffer：500 mmol/L Tris-HCl(pH 8.0), 2% NP-40, 10 mmol/L DTT。
注意事项：
1）SUMO Protease进行酶切时的最适pH值为8.0，最佳酶切温度为30℃。但SUMO Protease在较宽的pH范围(6.0-10.0)在较宽的温度范围(2~30℃)，较宽的离子强度范围(0-400mM NaCl)内均具有较高的酶活性。在实际操作过程中，为尽量保持目的蛋白的结构和生物活性，建议在4℃用SUMO Protease酶切过夜。
2）SUMO Protease在还原剂DTT(0.5~2mM)存在的情况下酶切活性更高，酶切体系中加入适当浓度DTT可以显着提高酶切效率，尤其是在长时间的酶切过程中，例如4ºC酶切过夜。
3）为达到最好的酶切效果，请保证重组蛋白为部分或完全纯化的蛋白。对于大部分融合蛋白，SUMO 蛋白酶所需 NaCl 的浓度不同的蛋白情况会有所差别，可根据实际情况在0～300mM 之间调节 NaCl 的浓度以达到最佳的效果。
